Motivos Epiya en la proteína CagA en aislamientos colombianos de Helicobacter pylori provenientes de la ciudad de Bogotá
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Date
2015Les auteurs
Rodríguez Gómez, Eliana RocíoDirecteur
Trespalacios Rangel, Alba AliciaÉditeur
Pontificia Universidad Javeriana
Faculté
Facultad de Ciencias
Programme
Maestría en Ciencias Biológicas
Titre obtenu
Magíster en Ciencias Biológicas
Type
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría
COAR
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résumé
Helicobacter pylori es una bacteria asociada con el desarrollo de enfermedades gastroduodenales como gastritis crónica, ulceras pépticas, linfoma tipo MALT y cáncer gástrico. El desarrollo de cáncer gástrico asociado con la bacteria, se ha relacionado fuertemente con el factor de virulencia CagA, una proteína que presenta sitios de fosforilación EPIYA que están relacionados con la capacidad oncogénica de la proteína. El objetivo de este estudio fue determinar los motivos EPIYA presentes en la proteína CagA en aislamientos de Helicobacter pylori. Se analizaron 85 aislamientos de H.pylori cagA positivos y mediante PCR se amplifico la región 3 del gen cagA. Los productos de PCR fueron secuenciados y finalmente analizados con herramientas bioinformáticas. Adicionalmente para confirmar la predicción sobre el número de repeticiones EPIYA basados en el tamaño del producto de PCR se realizó re-amplificación y posterior análisis de secuenciación. Se observó que el tamaño de los productos de PCR osciló entre 400pb - 700pb. 58 de los 85 aislamientos (68,2%) presentaron únicas bandas y 27 aislamientos (31,8%) dos o más bandas. La cepa de referencia NCTC11637 presento única banda de 500pb. Los aislamientos presentaron la siguiente distribución EPIYA: 7/85 AB (8,2%), 34/85 ABC (40%), 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 ABCCC (21,2%), sin embargo en 27 aislamientos existió coinfección con diferentes genotipos de cagA entre los más predominantes: 7 ABC-ABCC (26%) y 6 ABCC-ABCCC (22,2%). Se identificó que todos los aislamientos poseen cagA de origen occidental siendo el motivo EPIYA ABC el más predominante (40%), sin embargo 51,8% de los aislamientos presentaron múltiples repeticiones EPIYA-C: 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 EPIYA-ABCCC (21,2%), indicando que la mitad de población de Bogotá- Colombia infectada con Helicobacter pylori cagA positivo tiene un alto riesgo de desarrollar cáncer gástrico.
Abstrait
Helicobacter pylori is a bacterium associated with the development of gastro duodenal diseases such as chronic gastritis, peptic ulcers, MALT lymphoma and gastric cancer. The development of gastric cancer associated with H.pylori has been strongly related with the virulence factor CagA, protein having EPIYA phosphorylation sites, which are related with the oncogenic capacity of the CagA protein. The objective in this study, was to determine EPIYA motif present in the CagA protein in Helicobacter pylori isolates 85 cagA-positive Helicobacter pylori strains were analyzed and to amplify the 3 'region of cagA gene by PCR. The PCR products obtained were sequenced and finally analyzed with bioinformatic tools, additionally to confirm this prediction about the number of EPIYA repeats, based upon size of the PCR amplicons, we perform re-amplification and subsequent sequencing analysis We observed PCR products ranging in size between 400 bp to 700 bp. 58 of 85 Helicobacter pylori isolates (58, 2%) were observed a single band PCR product and 27 isolates (31, 8%) showed two or more bands. The reference strain NCTC 11637 exhibited to single band with size of 500 bp. The Isolates showed the following distribution EPIYA: 7/85 AB(8,2%), 34/85 ABC(40%), 26/85 ABCC(30,6%) y 18/85 ABCCC (21,2%), however observed coinfection with different cagA genotypes in 27 isolates among the most predominant: 7 ABC-ABCC(26%) y 6 ABCC-ABCCC(22,2%). We identified that all isolates were the Western cagA type being the most predominant EPIYA-ABC motif (40%), however 51, 8 % of isolates shown multiples EPIYA-C repetitions: 26/85 ABCC (30,6%) y 18/85 EPIYA-ABCCC(21,2%) indicating that half of the population of Bogota- Colombia infected with cagA positive Helicobacter pylori have higher risk of cancer gastric..
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