Potencial efecto del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo sobre astrocitos humanos en un modelo in vitro de scratch y privación de glucosa
Data
2018-12-11Autor(es)
Báez Jurado, Eliana MaríaDirector(es)
Barreto, GeorgeAvaliador
Giráldez, LisandroTapia, Silvia
Turner, Liliana Francis
Lamprea, Marisol
Capani, Franscisco
Publisher
Pontificia Universidad Javeriana
Faculdade
Facultad de Ciencias
Programa
Doctorado en Ciencias Biológicas
Título obtido
Doctor en Ciencias Biológicas
Tipo
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Doctorado
COAR
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Citación
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Resumo
Diferentes patologías y lesiones afectan el normal funcionamiento del sistema nervioso central (SNC). Patologías neurodegenerativas como Parkinson y Alzheimer o aquellas traumáticas como la isquemia, la lesión cerebral o la neuroinflamación representan una alta morbilidad en la población mundial. La mayoría de las lesiones alteran el correcto funcionamiento de las células cerebrales lo que implica la modificación del microambiente, respuestas alteradas o expresión de genes y proteínas frente al insulto. Los astrocitos son las células gliales más abundantes del sistema nervioso, dentro de sus funciones están: brindar un soporte metabólico y estructural a las neuronas, con lo cual contribuyen a su normal funcionamiento. Recientes estudios han evidenciado el papel fundamental que estas células tienen en la protección neuronal sobre todo en las lesiones traumáticas, patologías en las cuales se presentan cambios bioquímicos y moleculares que conllevan a un daño neuronal, seguido por la pérdida de funciones cognitivas y motoras. A pesar de considerar los astrocitos más resistentes que las neuronas a insultos cerebrales, pocos estudios ofrecen una idea de cómo los cambios en las funciones astrocíticas pueden llevar a la pérdida de la protección después de una lesión cerebral. En este punto y conociendo la importancia de los astrocitos, la hipótesis de esta investigación es que el daño mitocondrial causado en los astrocitos durante la lesión cerebral deteriora su funcionamiento y puede contribuir a la pérdida neuronal. Evidencias recientes muestran que el uso del medio condicionado de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano (CM-hMSCA) puede proporcionar un efecto protector que contrarresta el daño cerebral. Sin embargo, son muy pocos los estudios que han evaluado el efecto del CM-hMSCA en la protección de los astrocitos expuestos a scratch y privación de glucosa como posible alternativa terapéutica o de prevención en la lesión cerebral, así como en otras patologías.
Nuestros resultados indicaron que CM-hMSCA mejoró la viabilidad celular, redujo la fragmentación nuclear, atenuó la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y preservó el potencial de membrana mitocondrial y los parámetros ultraestructurales. Adicionalmente, se demostró que el CM-hMSCA regula las citocinas IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, TNF-alfa y también regula negativamente el calcio a nivel citoplásmico y tiene un efecto sobre la regulación de la dinámica mitocondrial y cadena respiratoria. Estas acciones están acompañadas por la regulación de la expresión de diferentes proteínas implicadas en vías de señalización como AKT/pAKT, ERK1/2/pERK, e incluso puede mediar la localización de Neuroglobina (Ngb) a nivel celular. Por otro lado, para caracterizar el mecanismo protector del CM-hMSCA, nuestros resultados revelan un aumento en la expresión de la neuroglobina y el silenciamiento genético de esta proteína reduce la acción protectora de CM-hMSCA en las células lesionadas. Por último, nosotros también realizamos una validación del modelo en astrocitos humanos, encontrando resultados similares en la protección y preservación de los astrocitos por el CM-hMSCA. Nuestros resultados sugieren que el tratamiento con CM-hMSCA podría ser una estrategia terapéutica prometedora para la protección de las células astrocíticas en las patologías cerebrales y que posiblemente la neuroglobina está mediando este efecto protector del CM-hMSCA.
Abstract
Different pathologies and injuries affect the normal functioning of the central nervous system (CNS). Neurodegenerative pathologies such as Parkinson's and Alzheimer's or those traumatic such as ischemia, brain injury or neuroinflammation represent a high morbidity in the world population. Most lesions disrupt the proper functioning of brain cells which involves modification of the microenvironment, altered responses or expression of genes and proteins against insult. Astrocytes are the most abundant glial cells of the nervous system, within their functions are: provide a metabolic and structural support to neurons, thereby contributing to their normal functioning. Recent studies have shown the fundamental role of these cells in neuronal protection, especially in traumatic lesions, pathologies in which biochemical and molecular changes occur that lead to neuronal damage, followed by the loss of cognitive and motor functions. Despite considering astrocytes more resistant than neurons to brain insults, few studies offer an idea of how changes in astrocytic functions can lead to loss of protection after a brain injury. At this point and knowing the importance of astrocytes, the hypothesis of this research is that mitochondrial damage caused in astrocytes during brain injury impairs their functioning and may contribute to neuronal loss. Recent evidence shows that the use of conditioned medium from mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue (CM-hMSCA) can provide a protective effect that counteracts brain damage. However, there are very few studies that have evaluated the effect of CM-hMSCA in the protection of astrocytes exposed to scratch and glucose deprivation as a possible therapeutic alternative or prevention in brain injury, as well as in other pathologies.
Our results indicated that CM-hMSCA improved cell viability, reduced nuclear fragmentation, attenuated the production of reactive oxygen species (ROS) and preserved mitochondrial membrane potential and ultrastructural parameters. Additionally, it was demonstrated that CM-hMSCA regulates the cytokines IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, TNF-alpha and also negatively regulates calcium at the cytoplasmic level and has an effect on the regulation of mitochondrial dynamics and respiratory chain. These actions are accompanied by the regulation of the expression of different proteins involved in signaling pathways such as AKT/pAKT, ERK1/2/pERK, and can even mediate the localization of Neuroglobin (Ngb) at the cellular level. On the other hand, to characterize the protective mechanism of CM-hMSCA, our results reveal an increase in the expression of neuroglobin and the genetic silencing of this protein reduces the protective action of CM-hMSCA in the injured cells. Finally, we also performed a validation of the model in human astrocytes, finding similar results in the protection and preservation of astrocytes by the CM-hMSCA. Our results suggest that treatment with CM-hMSCA could be a promising therapeutic strategy for the protection of astrocytic cells in brain pathologies and that neuroglobin is possibly mediating this protective effect of CM-hMSCA.
Palavras chave
Tejido adiposoMedio condicionado
Células madre mesenquimales
Neuroglobina
Scratch
Lesión cerebral
Astrocitos humanos
Migración
Keywords
Adipose tissueConditioned medium
Mesenchymal stem cells
Neuroglobin
Scratch assay
Brain injury
Human astrocytes
Migration
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