Influencia de la biomasa y la concentración de metanol en la producción de la enzima recombinante hexosaminidasa A en pichia pastoris
Fecha
2014Autor(es)
Hernández Pulido, Francy LilianaDirector(es)
Alméciga Díaz, Carlos JavierPublicador
Pontificia Universidad Javeriana
Facultad
Facultad de Ciencias
Programa
Microbiología Industrial
Título obtenido
Microbiólogo (a) Industrial
Tipo
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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Citación
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Resumen
En la actualidad la terapia de remplazo enzimático es una alternativa prometedora para el tratamiento de algunos errores innatos del metabolismo. Las enzimas empleadas para este fin son producidas de forma recombinante empleando diversos sistemas de expresión como lo son las bacterias, levaduras y células de animales o plantas. En el caso de las levaduras una de las más empleadas ha sido Pichia pastoris, la cual ha mostrado varias ventajas frente a los demás sistemas en cuanto a su productividad. Sin embargo, factores relacionados con las condiciones de cultivo, y concentración de biomasa o inductor tienen efectos importantes sobre la producción de la enzima recombinante. En este sentido, en el presente proyecto se caracterizaron los niveles de producción de la enzima Hexosaminidasa A producida de forma recombinante en la levadura P. pastoris, bajo diferentes concentraciones de biomasa y metanol. Con los resultados obtenidos se construyó un modelo para observar el comportamiento cinético de Pichia pastoris con un sustrato limitante. Los resultados mostraron que los mayores valores de actividad enzimática fueron obtenidos con una concentración inicial de glicerol de 4% y con una concentración de metanol del 0,5% durante la fase de inducción. Los resultados obtenidos en el presente trabajo constituyen información importante en el desarrollo de un proceso de producción eficiente de la enzima recombinante Hexosaminidasa A para uso en terapia de reemplazo enzimático para la enfermedad de Tay Sachs.
Abstract
At present enzyme replacement therapy is a promising alternative for the treatment of some inborn errors of metabolism. The enzymes employed for this purpose are recombinant produced using various expression systems such as bacteria, yeast and animal or plant cells. In the matter of yeasts one of the most use had been Pichia pastoris, this yeast had show many advantages in comparison with others systems talking about productivity. However, factors related to culture conditions and biomass concentration or inductor has important effects on the production of the recombinant enzyme. In this project production levels of hexosaminidase enzyme recombinant produced in yeast P. pastoris under different concentrations of biomass and methanol they were characterized. With the results a model was constructed to observe the kinetic behavior of Pichia pastoris with a limiting substrate. The results showed that higher enzyme activity values were obtained with an initial concentration of 4% glycerol and with a methanol concentration of 0.5% during the induction phase. The results obtained in this study are important information on the development of an efficient production process of the recombinant enzyme hexosaminidase A for use in enzyme replacement therapy for Tay Sachs.
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