Crioconservación de yemas de Physalis Peruviana (Ecotipo Colombia) por encapsulación-deshidratación
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Fecha
2012Autor(es)
Pineda Muñoz, AlexandraDirector(es)
Constantino Chuaire, SandraPublicador
Pontificia Universidad Javeriana
Facultad
Facultad de Ciencias
Programa
Biología
Título obtenido
Biólogo (a)
Tipo
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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Citación
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Resumen
Se evaluó una técnica de crioconservación para una muestra de Physalis peruviana ecotipo Colombia, mediante la metodología de encapsulación-deshidratación. Se evaluaron tratamientos escalonados de precultivos en medios enriquecidos con sacarosa, obteniendo 54% rebrote con dos precultivos de dos días cada uno, a concentraciones de 0.087M y 0.174M respectivamente. Estos fueron evaluados en diferentes condiciones de incubación obteniendo los mejores resultados en frío a 4?C y oscuridad. Para la deshidratación y osmoprotección se evaluaron dos concentraciones de sacarosa 0.75M y 1.0M en medio líquido por 24h. En ausencia de precultivos las altas concentraciones de sacarosa resultaron tóxicas en las yemas, inhibiendo su rebrote y futura regeneración. Los precultivos permitieron el acondicionamiento al tratamiento osmoprotector, que se logró exitosamente con una concentración de 0.75M de sacarosa, disminuyendo en ?16% el contenido de humedad inicial de las cápsulas. El secado en cabina de flujo de aire laminar de las cápsulas fue de 3:00h, logrando un contenido final de humedad de ?15%. Las yemas inmersas en nitrógeno líquido, y descongeladas al baño de María a 38?C aumentaron su rebrote en hasta 30% cuando rehidratadas, pero la reactivación y regeneración sólo fue posible con medio de regeneración suplementado con BAP en condiciones de penumbra. Se obtuvo un porcentaje de rebrote del 100% de las yemas críoconservadas, además del crecimiento directo sin la formación de callo. Los resultados obtenidos demuestran la eficacia de la técnica de encapsulación-deshidratación en una herbácea de clima tropical, y sirven como modelo para el establecimiento de futuros protocolos.
Abstract
A cryopreservation method was evaluated on a sample of Colombian ecotype Physalis peruviana using the encapsulation-dehydration technique. Sucrose preculture conditions of the apex were evaluated, obtaining the best results 54% regrowth with a two step preculture of 0.087M and 0.174M two day each. These were also grown under different light and temperature conditions obtaining best results in cold 4?C and darkness. For dehydration and osmoprotection two concentrations of sucrose 0.75M and 1.0M supplemented liquid medium for 24 hours was evaluated. In the absence of preculture conditions the high concentrations of sucrose resulted toxic on the tissues, inhibiting their regrowth and survival. Preculture with sucrose allowed the conditioning to the osmoprotection treatment, which was achieved with a concentration of 0.75M sucrose, minimizing final moist content of the beads to ?15%. The beads frozen in liquid nitrogen and thawed, increased their survival and regrowth up to 30% more when rehydrated, but reactivation y regeneration was only possible with regeneration medium supplemented with BAP under low light conditions. A survival of 100% of the cryopreserved beads was obtained, and direct growth withouth callus formation was observed in every case. Results obtained in the present study proof the success of encapsulation-dehydration technique for a herbaceous tropical species, y serves as model for the establishment of future protocols.
Palabras clave
Encapsulación-deshidrataciónConservación ex situ
Crioconservación
Osmoprotección
Sacarosa
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