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dc.contributor.advisorPoutou Piñales, Raúl Alberto
dc.contributor.advisorPedroza Rodríguez, Aura Marina
dc.creatorRivera Hoyos, Claudia Marcela
dc.date.accessioned2017-05-24T14:59:50Z
dc.date.available2017-05-24T14:59:50Z
dc.date.created2016
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10554/20388
dc.description.abstract"Las lacasas están generando un gran interés debido a sus potenciales aplicaciones en biotecnología. Son oxidasas multicobre que catalizan compuestos aromáticos y no-aromáticos, con la subsecuente reducción del oxígeno molecular a agua. En el presente trabajo se seleccionó el gen codificante para la lacasa POXA IB del hongo Pleurotos ostreatos. Este gen se optimizó para el uso de codones en Pichia pastons, contenido de GC y regiones que generen estructuras secundarias. Se evaluó la interacción del modelo computacional obtenido y su interacción con el sustrato ABTS [2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-ácido sulfónico)] realizando un docking molecular. Luego de realizar un diseño experimental Plackett-Burman, seguido de un diseño One Factor, se obtuvo una actividad lacasa de 1,343.52 ± 40.3 UL'1 a las 168h de cultivo en frascos de 500mL. El sobrenadante concentrado conteniendo la enzima POXA IB mantuvo su estabilidad entre 10-50 °C y retuvo más del 70% de la actividad enzimática residual a 60°C y del 50% a 70°C. Adicionalmente, la enzima fue más estable a pH 4 ± 0.2 con una actividad residual de más del 90%. La actividad residual más baja del 60% se obtuvo a pH 10 ± 0.2. Adicionalmente, los parámetros cinéticos fueron Vmax de 3.163 x 10'2 mM s""1, y Km de 1.720 mM. La decoloración del licor sintético a los 5 días de tratamiento fue de 19, 53 y 59%, para las concentraciones de licor de 10, 5 y 1% (v/v), y la remoción de DQO de 5, 30 y 53%, respectivamente, con actividades lacasa de 1399, 1346 y 1327 UL'1 para cada una de las concentraciones evaluadas. Toda esta información reunida, puede considerarse como hallazgos importantes a la luz de la expresión de enzimas recombinantes para su uso en sistemas ambientalmente amigables, debido al amplio rango de sustratos que pueden ser transformados por las lacasas. Contribuyendo a una gran gama de productos en diversos entornos: la industria, el uso clínico y química y aplicaciones ambientales."spa
dc.formatPDFspa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.publisherPontificia Universidad Javerianaspa
dc.rightsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 2.5 Colombia*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/co/*
dc.subjectLacasa Recombinantespa
dc.subjectTratamiento De Licor Negrospa
dc.subjectIndustria Papeleraspa
dc.subjectPichia Pastorisspa
dc.subjectEstabilidad Enzimáticaspa
dc.titleExpresión y producción de la lacasa POXA IB recombinante de Pleurotus ostreatus como alternativa para el tratamiento de los subproductos líquidos que se obtienen en el proceso de blanqueamiento de pulpa de celulosaspa
dc.rights.licenseDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.spa
dc.subject.lembDoctorado en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicasspa
dc.subject.lembEnzimasspa
dc.subject.lembIndustria del papelspa
dc.subject.lembBiotecnología ambientalspa
dc.type.spaTesis de doctoradospa
dc.publisher.departmentFacultad de Cienciasspa
dc.publisher.programDoctorado en Ciencias Biológicasspa
dc.rights.accesRightsAcceso Abiertospa
dc.description.abstractenglish"Laccases are generating a great interest clue to their biotechnological potential applications. They are multicopper oxidases that catalyze aromatic and non-aromatic compounds, concomitantly with molecular oxygen reduction to water. In this work was selected the encoding gene for POXA IB laccase from the fungus Pleurotus ostreatus. This gene was optimized for codon use in Pichia pastoris, GC content, and regions generating secondary structures. Laccase proposed computational model, and their interaction with ABTS [2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)] substrate was evaluated by molecular docking. After using a Plackett-Burman Design followed by a One Factor it was obtained a laccase activity of 1,343.52 ± 40.3 UL'1 at 16Sh of culture in a 500 inL shake-flask. Tire concentrated supernatant, containing the POXA IB enzyme, remained stable between 10 and 50°C and retained over 70% residual enzymatic activity at 60°C and 50% at 70°C. Besides the enzyme was more stable at pH 4 ± 0.2 with a residual activity greater than 90%. The lowest residual activity of 60% was obtained at pH 10 ± 0.2. Furthermore, kinetic parameters were Vmax of 3.163 x 10""2 mM s""1 and Km of 1.720 mM. The decolorization of synthetic black liquor at 5 days of treatment was 19, 53 y 59%, for 10, 5 y 1% (v/v) liquor concentrations, and the DQO removal 5, 30 y 53%, respectively, with a lacase activity of 1399, 1346 y 1327 UL""1 for each different concentration. All this information together can be considered as important findings in light of recombinant enzyme expression system utility for environmentally friendly designed expression systems, because of the wide range of substrates that laccases can transform. Contributing to a great gamut of products in diverse settings: industry, clinical and chemical use, and environmental applications."spa
dc.subject.subjectenglishRecombinant Laccasespa
dc.subject.subjectenglishBlack Liquor Treatmentspa
dc.subject.subjectenglishPaper Industryspa
dc.subject.subjectenglishPichia Pastorisspa
dc.subject.subjectenglishEnzyme Stabilityspa


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