Evaluación de la respuesta inmune de las células T específicas del virus Epstein-barr (veb) en pacientes VIH⁺ en los diferentes estadios clínicos de la enfermedad y en pacientes con linfoma asociado a VIH.
Date
2018-01Les auteurs
Hernández Preciado, Diana MarcelaÉditeur
Pontificia Universidad Javeriana
Faculté
Facultad de Ciencias
Programme
Maestría en Ciencias Biológicas
Titre obtenu
Magíster en Ciencias Biológicas
Type
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría
COAR
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résumé
La infección por VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana) origina una condición de inmunodeficiencia que contribuye a la alteración significativa en la vigilancia inmune frente a agentes infecciosos favoreciendo el desarrollo de tumores asociados a virus oncogénicos y persistentes, como es el caso de la infección oportunista por el virus Epstein Barr (VEB) [1, 2].
El VEB es un g-gamma herpesvirus humano ubicuo [3] que infecta a más del 95% de la población mundial, manteniendo una infección asintomática de por vida debido a la interacción del VEB con linfocitos B de memoria, lo que resulta en una infección latente en estas células en adultos sanos [4, 5]. El virus está etiológicamente relacionado con una amplia gama de tumores humanos incluyendo los linfomas B, debido a que expresa un perfil diferencial de proteínas oncogénicas virales en distintas fases de latencia [6] que están presentes en las células tumorales de diferentes tejidos [7, 8]. Estas proteínas oncogénicas latentes contribuyen a la patogénesis tumoral debido a que activan distintas rutas de señalización que alteran el ciclo celular, la apoptosis, la diferenciación celular e influyen en distintos mecanismos de migración y de supervivencia en las células tumorales [9, 10].
Los pacientes VIH+ tienen tendencia a desarrollar linfomas no Hodgkin B (LNH-B) agresivos, un tipo de cáncer relacionado con la muerte asociada a VIH. Se ha descrito que los pacientes VIH+ tienen un riesgo entre 60-200 veces mayor de desarrollar LNH-B y 8-10 veces linfomas de Hodgkin en comparación con individuos no infectados [11] y estos tumores se asocian en un alto porcentaje de casos a la infección activa con VEB, detectándose por ejemplo en un 60% de los casos en linfoma de Burkitt (BL) y en un 100% en linfomas primarios del sistema nervioso central (PCNSL) [12].
en todos los pacientes VIH+ se encontró disminución de linfocitos T CD4+ específicos de VEB productores de IL-2 y los pacientes en estadios avanzados de la enfermedad Entre los factores de riesgo implicados en la evolución a linfomas en pacientes VIH+ [10] se encuentran los altos niveles de plasmaviremia de VIH (>100.000 copias RNA/ml), alta carga viral de virus oncogénicos como VEB, recuentos bajos de células T CD4+ [12], el avanzado estado de la infección [11], la pérdida de multifuncionalidad y diversidad del repertorio TCR-Vβ [13, 14] y el fenómeno de cansancio en linfocitos T de memoria [3, 13]. Teniendo en cuenta estos antecedentes, este trabajo se ha dirigido a responder la siguiente pregunta de investigación: ¿Existen cambios en el repertorio TCR-Vβ, en el fenotipo y en el perfil de citocinas de linfocitos T de memoria mono y multifuncionales específicos del VEB en pacientes VIH+ en los diferentes estadios clínicos de la enfermedad?.
El objetivo general de este trabajo consistió en evaluar la frecuencia, diversidad y funcionalidad de la respuesta de linfocitos T CD4⁺ y CD8⁺ específicos del Virus Epstein-Barr (VEB) en pacientes VIH⁺ en diferentes estadios clínicos de la enfermedad y en pacientes con linfomas B. Para este estudio se utilizó sangre periférica de 62 pacientes VIH+ del Hospital Universitario San Ignacio en diferentes estadios clínicos (16 pacientes en Estadio 1, 20 en Estadio 2, 20 en Estadio 3 y 6 con linfoma no-Hodgkin B) y 27 controles sanos.
En el presente estudio observamos que los pacientes VIH+ en estadios avanzados de la enfermedad (estadio 3 y linfoma B) presentaron disminución significativa en todas las subpoblaciones de los linfocitos T CD4+ (vírgenes, memoria central, memoria efectora y efectores) y en los pacientes con linfoma una evidente pérdida de linfocitos T CD8+ de efectores con predominio del compartimento de memoria efectora respecto a los individuos sanos (p<0,05 respectivamente). De forma importante, (estadio 3 y linfoma) presentaron menores recuentos de linfocitos T CD4+ y T CD8+ productores de TNF-a+ e IFN-g+ respecto a los controles sanos (p<0,05 respectivamente); en conjunto con ausencia de linfocitos T CD4+ y CD8+ multifuncionales (productores simultáneos de TNF-a+/IFN-g+ IL-2). El análisis de las citoquinas solubles también mostró concentraciones disminuidas de TNF-a e IL-2 y una muy baja o ausente producción de IFN-g en todos los pacientes VIH+.
Finalmente, se observó que los pacientes VIH+ tienen un repertorio TCR-Vβ menos diverso con menor representación de familias de linfocitos T que son más frecuentes en los individuos sanos. Además en respuesta a VEB, los pacientes VIH+ presentaron disminución significativa de las familias Vb2, Vb4, Vb7.1, Vb9, Vb13.6, Vb14, Vb17 y Vb22 en los linfocitos T CD4+ y de las familias Vb14 y Vb17 en los linfocitos T CD8+. Las cuales juegan un papel clave en la protección frente a VEB en individuos sanos.
Estos resultados evidencian una menor vigilancia inmunológica frente a VEB, lo cual podría favorecer su reactivación en poblaciones de linfocitos B y su capacidad de transformar estas células en célula tumorales. Además, estos hallazgos en conjunto sugieren que la pérdida de inmunovigilancia frente a VEB, puede incrementar el riesgo de evolución clínica a linfomas de células B en estos pacientes.
Abstrait
HIV infection (Human Immunodeficiency Virus) causes an immunodeficiency condition that contributes to the significant alteration in the immune surveillance against infectious agents favoring the development of tumors associated with oncogenic and persistent viruses, as is the case of opportunistic infection by the Epstein Barr virus (EBV) [1, 2].
EBV is a ubiquitous human herpesvirus g-gamma [3] that infects more than 95% of the world population, maintaining a lifelong asymptomatic infection due to the interaction of EBV with memory B lymphocytes, resulting in an latent infection in these cells in healthy adults [4, 5].The virus is etiologically related to a wide range of human tumors including B lymphomas, because it expresses a differential profile of viral oncogenic proteins in different latency phases [6] that are present in tumor cells of different tissues [7, 8].These latent oncogenic proteins contribute to tumor pathogenesis because they activate different signaling pathways that alter the cell cycle, apoptosis, cell differentiation and influence different mechanisms of migration and survival in tumor cells [9, 10].
HIV+ patients have a tendency to develop aggressive non-Hodgkin's B (NHL-B) lymphomas, a type of cancer related to HIV. It has been described that patients HIV+ have a 60-200-fold greater risk of developing NHL-B and 8-10-fold Hodgkin's lymphomas compared to uninfected individuals [11] and these tumors are associated in a high percentage of active infection with EBV, being detected for example in 60% of cases in Burkitt's lymphoma (BL) and in 100% in primary lymphomas of the central nervous system (PCNSL) [12].
Among the risk factors involved in the evolution to lymphomas in patients HIV+ [10] are the high levels of HIV plasmaviremia (> 100,000 copies RNA/ml), high viral load of oncogenic viruses such as EBV, low CD4+ T cell counts [12], the advanced state of infection [11] the loss of multifunctionality and diversity of the TCR-Vb repertoire [13, 14] and the exhaustion phenomenon in memory T lymphocytes [3, 13]. Taking into account these antecedents, this work has been directed to answer the following research question: Are there changes in the TCR-Vb repertoire, in the monocyte and multifunctional memory T-cell cytokine profile and cytokines specific to EBV in patients HIV+ in the different clinical stages of the disease?.
The general objective of this work was to evaluate the frequency, diversity and functionality of the CD4⁺ and CD8⁺ T lymphocyte response specific to Epstein-Barr Virus (EBV) in HIV⁺ patients at different clinical stages of the disease and in patients with B lymphomas associated with HIV. For this study, peripheral blood from 62 patients HIV+ from San Ignacio University Hospital was used in different clinical stages (16 patients in Stage 1, 20 in Stage 2, 20 in Stage 3 and 6 with non-Hodgkin B lymphoma) and 27 healthy controls.
In the present study we observed that patients HIV+ in advanced stages of the disease (stage 3 and B lymphoma) had a significant decrease in all subpopulations of CD4+ T lymphocytes (virgins, central memory, effector memory and effectors) and in patients with lymphoma an evident loss of CD8+ T lymphocytes of effectors with predominance of the effector memory compartment compared to healthy individuals (p <0.05 respectively). Importantly, in all patients HIV+ there was a decrease in EBV-specific CD4+ T cells producing IL-2 and was found and patients in advanced stages of the disease (stage 3 and lymphoma) had lower CD4+ and CD8+ T lymphocyte counts of TNF-a+ and IFN-g+ compared to healthy controls (p <0.05 respectively); together with absence of multifunctional CD4+ and CD8+ T lymphocytes (simultaneous producers of TNF-a+/IFN-g+/IL-2+). The analysis of soluble cytokines also showed decreased concentrations of TNF-a and IL-2 and a very low or absent IFN-g producción production in all patients HIV+.
Finally, it was observed that patients HIV+ have a less diverse TCR-Vb repertoire with less representation of T lymphocyte families that are more frequent in healthy individuals. Furthermore, in response to EBV, patients HIV+ showed a significant decrease in the Vb2, Vb4, Vb7.1, Vb9, Vb13.6, Vb14, Vb17 and Vb22 families in the T lymphocytes. CD4+ and families Vb14 and Vb17 in CD8+ T lymphocytes. Which play a key role in the protection against EBV in healthy individuals.
These results show a lower immunological surveillance against EBV, which could favor its reactivation in B lymphocyte populations and its ability to transform these cells into tumor cells. In addition, these findings together suggest that the loss of immunosurveillance against EBV may increase the risk of clinical evolution to B-cell lymphomas in these patients.
Mots-clés
VIHVEB
Linfomas No-Hodgkin B
Linfocitos T de memoria y efectores multifuncionalidad
Repertorio TCR-VB
Keywords
HIVEBV non-Hodgkin
B-cell lymphoma
T cells
T-cell multifunctionality
TCR-VB repertoire
Non-Hodgkin B-cell lymphoma
Des thèmes
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Linfocitos T
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