Detección de células secretoras de anticuerpos totales y específicas de rotavirus en adultos sanos
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Fecha
2009-12-08Autor(es)
Narváez Rojas, Carlos FernandoCastro, Marcela
Ángel Uribe, Juanita
Franco Cortés, Manuel Antonio
Autor(es) Corporativo(s)
Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Medicina. Instituto de Genética Humana
Tipo
Artículo de revista
ISSN
2145-1362 / 2389-9298 (Electrónico)
Páginas
9-16
Tipo de artículo
Investigación
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Citación
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Título en inglés
Detection of total and rotavirus specific antibody secreting cells in healthy adultsResumen
Ya que los anticuerpos (Ac) son uno de los principales mecanismos de defensa contra la infección por rotavirus (RV), la capacidad de identificar a las células que secretan anticuerpos (CSA) totales y RV específicos es fundamental para procesos como el análisis de la respuesta inmune antiviral y la evaluación de nuevas vacunas. Aquí, se analiza por ELISPOT (ensayo funcional) y citometría de flujo (CF {ensayo fenotípico)) la frecuencia e isotipo de CSA totales y RV específicas en adultos sanos, usando células mononucleares de sangre periférica totales (CMSP) y a las moléculas CD38 y CD27 como marcadores para enriquecer en CSA.
Por cada millón de CMSP, aproximadamente 2,550 células producían Ac totales. La IgA fue el isotipo más frecuente, seguido de la IgG e IgM, con el 63%, 29.4% y 7.6% respectivamente. El análisis combinado del ELISPOT y la CF mostró que el 85% de las CSA expresaron CD38 y el 90% de ellas expresaron CD27. Una alta y significativa correlación entre las CSA detectadas por el ensayo funcional y el fenotípico fue encontrada cuando estos ensayos se realizaron en las poblaciones purificadas con CD38 y CD27. Con el enriquecimiento de CSA usando al CD38 y CD27, se logró además detectar CSA RV específicas que se encuentran en circulación en tan baja frecuencia como 0 a 40 CSA-RV por millón de CMSP. Para las células RV-específicas, también una buena correlación fue encontrada entre el ELISPOT y la CF. A pesar de su muy baja frecuencia, CSA antígeno específicas pueden ser detectadas en circulación de voluntarios sanos. Este acercamiento puede ser usado en la evaluación de vacunas, que para el caso particular del RV son necesarias mejorar.
Abstract
Antibodies (Ab) play a critical role in the immune response against rotavirus (RV). Protector Ab, are produced by antibody secreting cells (ASC). The capacity to detect ASC becomes fundamental in process like antiviral response analysis and vaccination testing. Here, we analyzed the frequency and isotype of total and RV-specific ASC by ELISPOT (functional assay) and flow cytometry (FC) in healthy adults using CD38 and CD27 like ASC markers.
In each million of peripherals blood mononuclear cells (PBMC), approximately 2,550 totals ASC were detected. IgA was the isotype preferentially expressed for circulating ASC followed by IgG and IgM with 63%, 29.4% and 7.6% of total ASC respectively. Paired analysis of immunomagnetic sorting, ELISPOT and FC shown that 85% and 90% of total ASC expressed CD38 and CD27 respectively. CD38 and CD27 ASC enrichment population were used to detect RV-specific ASC. None to 40 ASC per million of PBMC were detected by ELISPOT and FC and more interesting yet, a high correlation were found in the frequency of RV-specific ASC detected by both methods. This mixture assay can be used in the evaluation of new RV vaccines.
Palabras clave
Rotavirus (RV) células BCélulas secretoras de anticuerpos (CSA)
CD27
CD38
Citometría de flujo (CF)
Keywords
Rotavirus (RV)B-cells
Antibody Secreting Cells (ASC)
CD27
CD38
Elispot
Flow cytometry (FC)
Enlace al recurso
https://journalusco.edu.co/index.php/rfs/article/view/41/56Fuente
Revista Facultad de Salud; Vol. 1 Núm. 2 (2009)
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