Proporción de subpoblaciones linfoides T y B con fenotipo regulador, inflamatorio y autorreactivo en tejido gingival de pacientes con periodontitis
Fecha
2019-06Autor(es)
Blanco López, Margarita MaríaEvaluador(es)
Lafaurie Villamil, Gloria InésDe Ávila Quiroga, Juliette
González Duque, Octavio Alberto
Publicador
Pontificia Universidad Javeriana
Facultad
Facultad de Ciencias
Programa
Maestría en Ciencias Biológicas
Título obtenido
Magíster en Ciencias Biológicas
Tipo
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría
COAR
Tesis de maestríaCompartir este registro
Citación
Documentos PDF
Título en inglés
Proportion of T and B lymphoid subpopulations with regulatory, inflammatory and autoreactive phenotype in gingival tissue of patients with periodontitisResumen
La periodontitis es una patología infecciosa e inflamatoria crónica de etiología multifactorial asociada a la interacción entre la disbiosis de la biopelícula dental y la respuesta inmune, esta última caracterizada por la respuesta inmune innata, la cual tiene la capacidad de guiar el inicio y la progresión de la respuesta inmune adaptativa, de la cual, se han descrito roles importantes de las células y citoquinas que la conforman, como lo son los linfocitos T (LT) y linfocitos B (LB), aunque su participación en la patogénesis de la enfermedad periodontal ha sido ampliamente investigada; el papel exacto en la regulación, inflamación, autorreactividad y su localización en los diferentes sitios del tejido epitelial y conectivo encontrado en el periodonto, aún sigue siendo controversial. Por esta razón, es importante comprender los mecanismos involucrados, en el inicio y progresión de la enfermedad, para determinar la naturaleza de la respuesta inmune, la cual podría establecer el carácter de la enfermedad periodontal y por ende el efecto de la subpoblaciones de LT y LB, Por tal motivo el objetivo de este trabajo fue establecer la proporción de las subpoblaciones linfoides T y B con fenotipo regulador, inflamatorio y autorreactivo en tejido gingival de pacientes con periodontitis. Para esto se obtuvieron 24 muestras de tejido gingival con diagnostico de Sano/Gingivitis (S/G) (10) y Periodontitis (P) (14) a partir de incisiones a bisel interno, el resultado de esta incisión se dividió en dos partes, una fue procesada para tinción con los marcadores CD3, CD4, CD25, CD161, RIL23, FOXP3, CD19, CD5, CD1d por inmunohistoquímica y la segunda parte se analizo por citometría de flujo caracterizando, las población según esta distribución, T reguladoras: CD3, CD4, CD25, CD127, CD45 y FoxP3. TH17: CD3, CD4, CD25, CD161, RIL-23, CD45 y Células B: CD19, CD5, CD1d, CD3, CD45 y 7AAD. La pruebas estadistas realizadas a los resultado obtenidos fueron la prueba de normalidad Skewness/Kurtosis, t con varianzas iguales y ANOVA. Los resultados de esta investigación reportan expresión positiva en todos los marcadores evaluados por inmunohistoquímica fueron en algunas zonas del tejido S/G comparado con el tejido con P lo que puede sugerir que independientemente de la presencia de las poblaciones linfoides, el daño tisular no es mediado en su totalidad por ellas o que en su dinámica de plasticidad inmune determinada por el perfil de citocinas/factores que contribuyen a la destrucción tisular y de tejido óseo. En cuanto a la citometría de flujo, por primera vez se reporta la presencia de células TH17 reguladoras y proinflamatorias discriminadas por el marcador CD25 y los linfocitos B reguladores (CD1d+) en el tejido gingival, a su vez, se muestra una proporción mayor de fenotipos reguladores en tejido sano y enfermo, pero no hay diferencias estadísticamente significativas concluyentes entre los tejidos, lo que nos permite hipotetizar que mas allá de la proporción de diferentes fenotipos de células T y B, los fenómenos de plasticidad en la función de estas células de manera cíclica u otros factores inmunes asociados a la inmunidad innata podrían jugar un papel importante en la mediación del daño tisular que se observa en la enfermedad.
Abstract
Periodontitis is a chronic infectious and inflammatory pathology of multifactorial etiology associated with the interaction between dental biofilm dysbiosis and the immune response, the latter is characterized by the innate immune response, which has the ability to guide the initiation and progression of the adaptive immune response, from where, It has been described important roles from the cels and cytokines that compose them as are T lymphocytes (LT) and B lymphocytes (LB), although their participation in the pathogenesis of periodontal disease has been extensively investigated; the exact role in regulation, inflammation, autoreactivity and its localization in the different epithelial and connective tissue sites found in the periodontium, still remains controversial. For this reason, it is important to understand the mechanisms involved, at the beginning and progression of the disease, to determine the nature of the immune response, which could establish the character of the periodontal disease and therefore the effect of the subpopulations of LT and LB, For this reason the objective of this work is to establish the proportion of the T and B lymphoid subpopulations with regulatory, inflammatory and autoreactive phenotype in gingival tissue of patients with periodontitis. For this, 24 gingival tissue samples were obtained with a diagnosis of Sano / Gingivitis (S / G) (10) and Periodontitis (P) (14) from internal bevel incisions, the result of this incision was divided into two parts, one was processed for staining with the markers CD3, CD4, CD25, CD161, RIL23, FOXP3, CD19, CD5, CD1d by immunohistochemistry and the second part was analyzed by flow cytometry, characterizing the population according to this distribution, regulatory T: CD3, CD4, CD25, CD127, CD45, and FoxP3. TH17: CD3, CD4, CD25, CD161, RIL-23, CD45 and B cells: CD19, CD5, CD1d, CD3, CD45 and 7AAD. The statistical tests performed on the results obtained were the Skewness / Kurtosis normality test, t with equal variances and ANOVA. The results of this research report positive expression in all the markers evaluated by immunohistochemistry were in some areas of the S / G tissue compared to the tissue with P, which may suggest that regardless of the presence of lymphoid populations, tissue damage is not mediated. entirely by them or in their dynamics of immune plasticity determined by the profile of cytokines / factors that contribute to the destruction of tissue and bone tissue. Regarding flow cytometry, for the first time the presence of regulatory and pro-inflammatory TH17 cells discriminated by the CD25 marker and regulatory B lymphocytes (CD1d +) is reported in the gingival tissue, in turn, a higher proportion of phenotypes are shown regulators in healthy and diseased tissue, but there are no conclusive statistically significant differences between the tissues, which allows us to hypothesize that beyond the proportion of different phenotypes of T and B cells, the plasticity phenomena in the function of these cells in a Cyclical or other immune factors associated with innate immunity could play an important role in mediating the tissue damage seen in the disease.
Palabras clave
Inmunología oralEnfermedad periodontal
Periodontitis
Linfocitos
Linfocito B
Linfocito T
Citoquinas
Inmunhistoquimica
Cartometría de flujo
Keywords
Oral immunologyPeriodontal disease
Periodontitis
Lymphocytes
B lymphocyte
T lymphocyte
Cytokines
Immunhistochemistry
Flow citrometry
Temas
Maestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicasInmunología
Periodontitis
Linfocitos B
Células T
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