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dc.rights.licenceAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional*
dc.contributor.advisorAlméciga-Diaz, Carlos Javier
dc.contributor.advisorEspejo Mojica, Angela Johana
dc.contributor.authorDuarte Villanueva, María Camila
dc.date.accessioned2022-07-01T15:12:36Z
dc.date.available2022-07-01T15:12:36Z
dc.date.created2022-06-10
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10554/60527
dc.description.abstractLa Mucopolisacaridosis tipo II (MPS II), también conocida como Síndrome de Hunter, es un trastorno ligado al cromosoma X que produce una afección multisistémica y en los casos más graves, genera daños en el Sistema Nervioso Central (SNC). Este trastorno se da por la mutación en el gen IDS y con ello la deficiencia en la producción de la enzima Iduronato 2-Sulfato Sulfatasa (EC 3.1.6.13 - IDS). La MPS II hace parte de las Enfermedades de Depósito Lisosomal (EDL) debido a la acumulación de los Glicosaminoglicanos (GAGs) Heparán Sulfato (HS) y Dermatán Sulfato (DS) en los compartimientos lisosomales. Dicha acumulación desencadena desórdenes bioquímicos los cuales hacen parte de un grupo más grande de enfermedades conocidas como Errores Innatos del Metabolismo (EIM). En la actualidad, la Terapia de Reemplazo Enzimático (TRE) es utilizada como tratamiento para la MPS II, la cual, a través de una proteína recombinante, disminuye los niveles de GAGs en los lisosomas. Sin embargo, esta terapia presenta algunas limitaciones de acceso, principalmente debidas al costo de la terapia. Durante los últimos años, en el Instituto de Errores Innatos del Metabolismo (IEIM) se ha venido trabajando en la producción de enzimas recombinantes activas obtenidas a partir de sistemas de expresión de fácil manipulación y alta estabilidad genética. En específico para la producción de la enzima IDS, se utilizó la cepa de Komagataella phaffii GS115 con la secuencia del ADN copia (cADN) optimizada, obteniendo una caracterización detallada sobre esta proteína, además de mostrar resultados favorables en el ensayo de captura celular de forma dependiente de la dosis (50nM y 100nM), sin necesidad de modificar la enzima o a las células evaluadas. Sin embargo, aún no se tiene claro el efecto que la IDS humana recombinante (rhIDS) producida en Komagataella phaffii GS115 tiene sobre fibroblastos de pacientes con Síndrome de Hunter, por esta razón en este trabajo se evaluó el efecto de la enzima recombinante IDS sobre un modelo in vitro de fibroblastos de pacientes con Mucopolisacaridosis tipo II. Los resultados obtenidos confirman que la rhIDS es capaz de ser internalizada en las células evaluadas en una manera dependiente de concentración y permiten la degradación de los sustratos acumulados en el lisosoma, además de establecer un precedente de la reducción significativa de glicosoaminoglicanos a una concentración de 100nM. usando como sistema de expresión una levadura con una secuencia optimizada del cADN, permitiendo dejar una línea base para que se generen futuras investigaciones que terminen en el desarrollo de una nueva opción de tratamiento para la MPS II.spa
dc.description.sponsorshipInstituto de Errores del metabolismospa
dc.formatPDFspa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.publisherPontificia Universidad Javerianaspa
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectIduronato 2-sulfato sulfatasaspa
dc.subjectKomagataella phaffii GS115spa
dc.subjectSíndrome de Hunterspa
dc.subjectErrores innatos del metabolismospa
dc.subjectEnfermedades de depósito lisosomalspa
dc.subjectProteínas recombinantesspa
dc.titleEvaluación de la enzima Iduronato 2-sulfato sulfatasa humana recombinante producida en Komagataella phaffii GS115 en un modelo in vitro de fibroblastos de pacientes con Mucopolisacaridosis tipo II (Síndrome de Hunter)spa
dc.type.hasversionhttp://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa
dc.title.englishEvaluation of the recombinant human Iduronate 2-sulfate sulfatase enzyme produced in Komagataella phaffii GS115 in an in vitro model of fibroblasts from patients with Mucopolysaccharidosis type II (Hunter Syndrome)spa
dc.contributor.evaluatorGutiérrez Rojas, Ivonne Del Socorro
dc.subject.keywordIduronate 2-sulfate sulfatasespa
dc.subject.keywordKomagataella phaffii GS115spa
dc.subject.keywordRecombinant proteinsspa
dc.subject.keywordHunter syndromespa
dc.subject.keywordInborn errors of metabolismspa
dc.subject.keywordLysosomal storage diseasesspa
dc.description.abstractenglishMucopolysaccharidosis type II (MPS II), also known as Hunter syndrome, is an X-linked disorder that produces a multisystemic condition and, in the most severe cases, generates damage to the Central Nervous System (CNS). This disorder is caused by the mutation in the IDS gene and with it the deficiency in the production of the enzyme Iduronate 2-Sulphate Sulfatase (EC 3.1.6.13 - IDS). MPS II is part of Lysosomal Storage Diseases (LDS) due to the accumulation of Glycosaminoglycans (GAGs) Heparan Sulfate (HS) and Dermatan Sulfate (DS) in lysosomal compartments. This accumulation triggers biochemical disorders which are part of a larger group of diseases known as Inborn Errors of Metabolism (IEM). Currently, Enzyme Replacement Therapy (ERT) is used as a treatment for MPS II, which, through a recombinant protein, decreases GAG levels in lysosomes. Nevertheless, this ERT has some access restrictions due, in part, to the high cost associated with the therapy. In recent years, the Institute for Inborn Errors of Metabolism (IEIM) has been working on the production of active recombinant enzymes obtained from expression systems that are easy to manipulate and have high genetic stability. Specifically, for the production of the IDS enzyme, Komagataella phaffii GS115 strain was generated with the optimized DNA copy (cDNA) sequence of IDS gene, obtaining a detailed characterization of this protein, in addition to showing favorable results in the cellular capture assay, without the need to modify the enzyme or the cells evaluated. However, the effect that recombinant human IDS (rhIDS) produced in Komagataella phaffii GS115 has on fibroblasts from patients with Hunter Syndrome is not yet clear, for this reason in this work the effect of the recombinant enzyme IDS on an in vitro model of fibroblasts from patients with mucopolysaccharidosis type II. The results obtained confirm that rhIDS is capable of being internalized in the evaluated cells in a concentration-dependent manner and allows the degradation of substrates accumulated in the lysosome. The results obtained allow establishing a precedent for the significant reduction of glycosaminoglycans at a concentration of 100nM using a yeast with an optimized cDNA sequence as an expression system, allowing a baseline to be generated for future research that ends in the development of a treatment for MPS II with low production cost.spa
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessspa
dc.publisher.programMicrobiología Industrialspa
dc.publisher.facultyFacultad de Cienciasspa
dc.type.localTesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregradospa
dc.subject.armarcMicrobiología industrial - Tesis y disertaciones académicasspa
dc.subject.armarcErrores innatos del metabolismospa
dc.subject.armarcMucopolisacaridosis IIspa
dc.subject.armarcProteínas recombinantesspa
dc.description.degreenameMicrobiólogo (a) Industrialspa
dc.description.degreelevelPregradospa
dc.identifier.instnameinstname:Pontificia Universidad Javerianaspa
dc.identifier.reponamereponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javerianaspa
dc.identifier.repourlrepourl:https://repository.javeriana.edu.cospa
dc.type.coarhttp://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.rights.localDe acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi (nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados, respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin ánimo de lucro ni de comercialización. De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi (nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi (nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales. Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración, presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí (nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad Javeriana por tales aspectos. Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré (continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o restricción alguna, puesto que, de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales derivados del régimen del Derecho de Autor. De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión Andina 351 de 1993, "Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los autores", los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su observancia.spa
dc.rights.coarhttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2spa
dc.type.driverinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis


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