Selección de las condiciones de cultivo mixotrófico para Chlorella sp. y aprovechamiento de biomasa algal
Date
2023-05-31Authors
Chavez Uribe, IsabellaDirectors
Pedroza Rodríguez, Aura MarinaEvaluators
Gómez Méndez, Luis DavidPublisher
Pontificia Universidad Javeriana
Faculty
Facultad de Ciencias
Program
Microbiología Industrial
Obtained title
Microbiólogo (a) Industrial
Type
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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Citación
Metadata
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English Title
Selection of mixotrophic cultivation conditions for Chlorella sp. and utilization of algal biomass utilization of algal biomassResumen
La biomasa de la microalga Chlorella sp. es de gran interés en el área agrícola, pues en conjunto con otros materiales lignocelulósicos y materiales llenantes, funciona como acondicionador suelos, fertilizante y en este caso, por como hidroretenedor, con el fin de mantener cantidades de agua retenida en suelo por periodos prolongados de tiempo. Para la obtención de la biomasa de Chlorella sp., fue necesario realizar un diseño estadístico Plackett-Burman (DPB) con el fin de optimizar factores operaciones y de crecimiento para obtener el máximo de biomasa algal a un tiempo reducido; lográndose identificar los factores nutricionales u operacionales que permitieron un aumento en la velocidad de crecimiento de Chlorella sp.; biomasa que fue usada para la posterior producción y formulación del biohidroretenedor. Dicho lo anterior, el objetivo de este trabajo fue la selección de las condiciones de cultivo que favorecieron el crecimiento mixotrófico de Chorella sp. para el desarrollo de un biohidroretenedor.
Las condiciones tanto operacionales como de cultivo son de importancia para el crecimiento de Chlorella sp.; para poder optimizar su crecimiento al menor tiempo posible y donde la producción de biomasa algal sea un valor representativo, fue necesario evaluar las diferentes variables de cultivo y sus concentraciones para establecer las condiciones adecuadas donde Chlorella sp., crecerá en un menor tiempo. Es por esto, que en este estudio se realizó un diseño estadístico Plackett-Burman el cuál contó con 10 factores (7 condiciones de cultivo y 3 condiciones operacionales) a 2 niveles. De los tratamientos evaluados, el tratamiento 8 donde se formó la mayor concentración de biomasa en peso seco (g/L) , además, se identificaron los factores glucosa y nitrato de sodio como los más contribuyentes para la obtención de biomasa, según la comparación de medias.
Se realizó la curva de crecimiento de la microalga donde se tuvo en cuenta dos tipos de variables respuesta, las asociadas al crecimiento y los parámetros químicos. Relacionado al crecimiento de Chlorella sp., se determinó que la producción máxima de biomasa se da al día 4 de la cinética; por otro lado, teniendo en cuenta los parámetros químicos, se obtuvieron porcentajes de disminución superiores al 80 %, presentando valores de 99.7 % para carbono orgánico total (COT), 98.4 % para nitrógeno total (Nt), 92.1 % para nitratos (NO3), 88.1 % para nitritos (NO2) y 97.9 % para ortofosfatos (PO4).
De los medios de cultivo químicamente definidos, como el caldo nutritivo, czapek, medio semi complejo y el agua residual proveniente del tratamiento secundario de la planta de aguas residuales, se obtuvo que el medio que ofrece la fuente de carbono, nitrógeno y fósforo para el crecimiento de Chlorella sp fue el caldo nutritivo, un medio diferente al Bold.
De los materiales empleados para la formulación del biohidroretenedor (BHR), se encontraban el biochar, el cual se hizo a partir de salvado de trigo, borra de café y celulosa comercial; parte importante de este BHR fue el lodo algal recuperado tras el proceso de coagulación de lotes provenientes del fotobiorreactor terciario de la planta de tratamiento de aguas residuales no domésticas (ARnD); finalmente, se adicionó un consorcio de bacterias benéficas como Azotobacter chroococcum, cepa ATCC 9043; Pseudomonas sp., Pseudomonas flurescens y Kosakonia sp. Respecto a los resultados de viabilidad de las bacterias a lo largo de 45 días, se determinó que no hubo una perdida en unidades logarítmicas respecto al tiempo inicial de las bacterias solubilizadoras de fósforo, fijadoras de nitrógeno, bacterias totales y bacterias fluorescentes, obteniéndose 4.7x1012 , 2.1x1012 , 6.6x1012, 3.3x109 UFC/g respectivamente. Para la prueba de adsorción de agua del biohidroretenedor teniendo en cuenta el Hidrokeeper como control, se determinó que en 180 minutos este biohidroretenedor es capaz de adsorber 65 ml/g de agua, sugiriendo hacer una nueva formulación del biohidroretenedor, enfocándose especialmente en la cantidad de celulosa y biomasa algal que se deberán adicionar para aumentar la capacidad de adsorción del biohidroretenedor.
Abstract
The biomass of the microalgae Chlorella sp., is of great interest in the agricultural area, because in conjunction with other lignocellulosic materials and fillers, it functions as a soil conditioner, fertilizer and in this case, as a hydro-retention agent, in order to maintain quantities of water retained in the soil for prolonged periods of time. In order to obtain the biomass of Chlorella sp., it was necessary to carry out a statistical Plackett-Burman design (SPB) in order to optimize operational and growth factors to obtain the maximum algal biomass in a reduced time; it was possible to identify the nutritional or operational factors that allowed an increase in the growth rate of Chlorella sp.; biomass that was used for the subsequent production and formulation of the biohydroretainers. Having said that, the objective of this work was the selection of the culture conditions that favored the mixotrophic growth of Chorella sp., for the development of a biohydroretention agent.
Both operational and culture conditions are important for the growth of Chlorella sp.; in order to optimize its growth in the shortest possible time and where the production of algal biomass is a representative value, it was necessary to evaluate the different culture variables and their concentrations to establish the appropriate conditions where Chlorella sp., will grow in the shortest time. For this reason, a Plackett-Burman statistical design was used in this study, which had 10 factors (7 culture conditions and 3 operational conditions) at 2 levels. Of the treatments evaluated, the highest biomass concentration in dry weight (g/L) was formed in treatment 8, and the factors glucose and sodium nitrate were identified as the most important contributors to biomass production, according to the comparison of means.
The growth curve of the microalgae was carried out, taking into account two types of response variables, those associated with growth and chemical parameters. In relation to the growth of Chlorella sp., it was determined that the maximum biomass production occurs on day 4 of the kinetics; on the other hand, taking into account the chemical parameters, percentages of decrease of more than 80 % were obtained, presenting values of 99.7 % for total organic carbon (TOC), 98.4 % for total nitrogen (Nt), 92.1 % for nitrates (NO3), 88.1 % for nitrites (NO2) and 97.9 % for orthophosphates (PO4).
From the chemically defined culture media, such as nutrient broth, czapek, semi-complex medium and wastewater from the secondary treatment of the wastewater plant, it was obtained that the medium that offers the source of carbon, nitrogen and phosphorus for the growth of Chlorella sp., was the nutrient broth, a medium different from Bold.
Of the materials used for the formulation of the bio-hydro retainer (BHR), the biochar was made from wheat bran, coffee grounds and commercial cellulose; An important part of this BHR was the algal sludge recovered after the coagulation process of batches from the tertiary photobioreactor of the non-domestic wastewater treatment plant (WWTP); finally, a consortium of beneficial bacteria was added, such as Azotobacter chroococcum, strain ATCC 9043; Pseudomonas sp. , Pseudomonas flurescens and Kosakonia sp. Regarding the results of bacterial viability over 45 days, it was determined that there was no loss in logarithmic units with respect to the initial time of phosphorus solubilizing bacteria, nitrogen fixing bacteria, total bacteria and fluorescent bacteria, obtaining 4.7x1012 , 2.1x1012 , 6.6x1012 , 3.3x109 CFU/g respectively. For the water adsorption test of the hydro retainer, taking into account the Hydrokeeper as a control, it was determined that in 180 minutes this bio-hydro retainer is capable of adsorbing 65 ml/g of water, suggesting a new formulation of the bio-hydro retainer, focusing especially on the amount of cellulose and algal biomass that should be added to increase the adsorption capacity of the bio-hydro retainer.
Keywords
Chlorella sp.Mixotrophy
Algal biomass
Bio-hydro retainer
Biochar
Beneficial microorganisms
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