Comparación de la capacidad de internalización y degradación de sustratos lisosomales in vitro en dos modelos celulares de macrófagos y fibroblastos para el estudio de enfermedades por almacenamiento lisosomal

Abstract

Las enfermedades de depósito lisosomal (EDL) constituyen un conjunto de aproximadamente 70 trastornos que forman parte de los errores innatos del metabolismo (EIM). Una de las estrategias para estudiar y caracterizar estas enfermedades es el uso de modelos celulares in vitro, entre los que se encuentran los fibroblastos (un modelo celular ampliamente empleado, aunque con algunas limitaciones) y los macrófagos (células representativas del sistema reticuloendotelial, con gran potencial en el estudio de estas patologías). Debido a la falta de estudios que comparen la actividad lisosomal en ambos modelos celulares, esta investigación buscó realizar un estudio bioquímico comparativo de la actividad lisosomal entre macrófagos derivados de monocitos humanos obtenidos a partir de muestras de sangre periférica (hMacs) y fibroblastos humanos, con el fin de evaluar su utilidad en el estudio celular in vitro de las EDL. Para este fin, se evaluó la actividad de tres enzimas: β-galactosidasa, β-hexosaminidasa y β-glucuronidasa, así como la masa lisosomal. Adicionalmente, se propuso un método para evaluar la capacidad de internalización y degradación de sustratos lisosomales (glicosaminoglicanos-GAGs) en las células estudiadas. Los resultados mostraron mayores actividades de las enzimas lisosomales en los macrófagos WT en comparación con los fibroblastos WT. Por otro lado, aunque el ensayo de reto no presentó diferencias significativas entre las poblaciones tratadas y no tratadas en las condiciones inicialmente propuestas, se evidenció potencial en la estimulación de la actividad lisosomal después de 6 horas de tratamiento, lo que abre posibilidades para futuras investigaciones.