Evaluación de las condiciones de reacción para para la medición de la actividad lacasa de la enzima recombinante POXA 1B de Pleurotus ostreatus

Ferrucho Calle, Maria Camila

Evaluación de las condiciones de reacción para para la medición de la actividad lacasa de la enzima recombinante POXA 1B de Pleurotus ostreatus

dc.contributor.advisor	Poutou Piñales, Raúl A.	spa
dc.contributor.author	Ferrucho Calle, Maria Camila	spa
dc.contributor.evaluator	Pedroza Rodríguez, Aura Marina	spa
dc.date.accessioned	2023-09-26T20:21:57Z
dc.date.available	2023-09-26T20:21:57Z
dc.date.created	2018-06-16	spa
dc.description.abstract	Las lacasas son glicoproteínas que han generado un gran interés a nivel biotecnológico debido a sus aplicaciones potenciales en diversos campos. Estas enzimas oxidan compuestos aromáticos con la subsecuente reducción del oxígeno molecular a agua. La medición de la actividad enzimática varía para cada lacasa dependiendo del origen, de los diferentes sustratos, buffers o condiciones usadas durante la reacción. Esta medición es utilizada para evidenciar la producción y funcionamiento de la lacasa, por lo que en este trabajo se determinaron las mejores condiciones de reacción para la medición de la actividad enzimática de la lacasa recombinante POXA 1B (rPOXA 1B) de Pleurotus ostreatus expresada en Pichia pastoris. Se realizaron dos “Optimal Designs” con los buffer acetato y citrato con los que se evaluaron diferentes pH, concentraciones de ABTS y longitudes de onda para la medición de la actividad lacasa. La mejor combinación, se utilizó para conocer la cinética de la enzima concentrada y determinar la Vmax y la constante de Michaelis-Menten (Km). Los “Optimal Designs” mostraron que en buffer acetato el tratamiento AB T2 fue el mejor, mientras que en buffer citrato fue el tratamiento CB T2. La comparación de medias entre todos los tratamientos mostró que CB T2 fue el mejor con 5291.665 ± 83.8 UL-1 UL-1 de actividad lacasa. La cinética enzimática llevada a cabo en las condiciones de CB T2 arrojó una Km de 0.0372 mM (aparente) y una Vmax de 0.0105 mM min-1 (aparente); indicando que las nuevas condiciones de ensayo aumentaban la afinidad de la rPOXA 1B por el ABTS (ácido 2,2'–azino–bis–(3–etillbenzotiazolin–6–sulfónico) en comparación con los parámetros cinéticos aparentes previamente reportados por nuestro propio grupo en buffer acetato.	spa
dc.description.abstractenglish	Laccases are glycoproteins that have gained significant interest due to their potential biotechnological applications in various industrial fields. These enzymes oxidize aromatic compounds with the subsequent reduction of molecular oxygen to water. The measurement of enzymatic activity varies for each laccase depending on their origin, the different substrates, buffers or conditions used during the reaction. This assay is used to determine the production and functioning of the laccase, thereby in this work were determined the best reaction conditions to measure of the enzymatic activity of the recombinant laccase POXA 1B (rPOXA 1B) of Pleurotus ostreatus expressed in Pichia pastoris. Two "Optimal Designs" were performed with acetate or citrate buffer in which different pH, ABTS concentrations and wavelengths were evaluated for the measurement of laccase activity. Best combination was used to know the concentrated enzyme kinetics and to determine the Vmax and the Michaelis-Menten constant (Km). The "Optimal Designs" showed that with acetate buffer the treatment AB T2 was the best, while with citrate buffer it was the treatment CB T2. The comparison of means between all the treatments showed that CB T2 was the best with 5291.665 ± 83.8 UL-1 of laccase activity. The enzymatic kinetics carried out with the CB T2 conditions showed a Km of 0.0372 mM (apparent) and a Vmax of 0.0105 mM min-1 (apparent); indicating that the new assay conditions increased the affinity of rPOXA 1B for ABTS (2,2'-azino-bis- (3-ethylen-benzothiazoline-6-sulfonic acid) in comparison with the apparent kinetic parameters previously reported by our own group in acetate buffer.	spa
dc.description.degreelevel	Pregrado
dc.description.degreename	Microbiólogo (a) Industrial
dc.format	PDF
dc.format.mimetype	application/pdf
dc.identifier.instname	instname:Pontificia Universidad Javeriana
dc.identifier.reponame	reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana
dc.identifier.repourl	repourl:https://repository.javeriana.edu.co
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10554/65480
dc.language.iso	spa
dc.publisher	Pontificia Universidad Javeriana
dc.publisher.faculty	Facultad de Ciencias
dc.publisher.program	Microbiología Industrial
dc.rights.accessrights	info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coar	info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.licence	Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional
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dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subject	Buffer citrato
dc.subject	Buffer acetato
dc.subject	Lacasa recombinante
dc.subject	Medición de actividad lacasa
dc.subject	“Optimal Designs”
dc.subject	Parámetros cinéticos
dc.subject	rPOXA 1B
dc.subject.armarc	Microbiología industrial - Tesis y disertaciones académicas
dc.subject.armarc	Glucoproteínas	spa
dc.subject.armarc	Enzimas	spa
dc.subject.keyword	Acetate buffer
dc.subject.keyword	Citrate buffer
dc.subject.keyword	Kinetic parameters
dc.subject.keyword	Measurement of laccase activity
dc.subject.keyword	“Optimal Designs”
dc.subject.keyword	Recombinant laccase
dc.subject.keyword	rPOXA 1B
dc.title	Evaluación de las condiciones de reacción para para la medición de la actividad lacasa de la enzima recombinante POXA 1B de Pleurotus ostreatus	spa
dc.title.english	Evaluation of the reaction conditions for the measurement of the laccase activity of the recombinant POXA 1B enzyme of pleurotus ostreatus	spa
dc.type.coar	http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f
dc.type.driver	info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.hasversion	http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa
dc.type.local	Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado