Utilidad de la Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) para la tipificación molecular de Listeria monocytogenes
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Date
2012Les auteurs
Cardozo Bernal, Ángela MaríaÉditeur
Pontificia Universidad Javeriana
Faculté
Facultad de Ciencias
Programme
Microbiología Industrial
Titre obtenu
Microbiólogo (a) Industrial
Type
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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résumé
El objetivo principal de este trabajo fue determinar mediante una revisión bibliográfica si la Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) es la herramienta molecular más adecuada para la tipificación y diferenciación de aislamientos de Listeria monocytogenes. Para cumplir este objetivo se seleccionaron 70 artículos científicos, los cuales fueron organizados y tabulados por año de publicación, desde 1992 hasta el 2012, lo que permitió obtener información como, el tipo de PFGE y las enzimas de restricción utilizadas, el protocolo empleado y la metodología de análisis de los patrones de bandeo. Se encontró que la PFGE permite la separación de moléculas de ADN de alto peso molecular (hasta 10Mpb) a través del uso de enzimas de restricción que cortan el ADN de L. monocytogenes con una baja frecuencia, generando patrones de restricción simples (10-20 bandas) lo que simplifica el análisis, el cual se realiza a través de un software que permite la comparación rápida y fácil de los aislamientos. La PFGE ha demostrado tener mayor poder discriminativo que la mayoría de técnicas moleculares utilizadas para la tipificación de L. monocytogenes. En el protocolo de PFGE estandarizado (variante CHEF) para la subtipificación de L. monocytogenes se requiere la combinación de las enzimas de restricción ApaI y AscI, lo que permite reducir el tiempo de la corrida a 30h. Mediante el análisis y agrupación de los datos obtenidos en PFGE ha sido posible la agrupación de los aislamientos de L. monocytogenes en 3 linajes genéticos. La nomenclatura de los linajes varía entre investigadores, sin embargo, por lo general se sabe que en el linaje I están incluidos los serotipos 1?2b, 3b, 4b, 4d, 4e y 7, en el linaje II los serotipos 1?2a, 3a, 1?2c y 3c y en el linaje III, los serotipos 4a y 4c, así como algunas cepas del serotipo 4b. Sin embargo, se ha reportado la existencia de un linaje IV el cual fue identificado por primera vez mediante la técnica MLGT (Multilocus genotyping) y se compone de los serotipos 4a, 4b y 4c, los cuales difieren considerablemente de los miembros del linaje III. Ninguno de los artículos científicos revisados menciona la agrupación de cepas del linaje IV a través de la PFGE, lo que sugiere que esta técnica, podría no ser la que mejor para discriminar entre los linajes III y IV.
Abstrait
The main objective of this study was to determine through literature review if Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE) is the most appropriate tool for the molecular characterization and differentiation of Listeria monocytogenes isolates. To meet this goal we selected 70 scientific papers, which were organized and tabulated by year of publication, since 1992 to 2012, which allowed getting information such as the type of PFGE and restriction enzymes used, the most relevant results, the protocol used and the methodology of analysis of banding patterns. PFGE was found allowing the separation of DNA molecules of high molecular weight (up 10Mpb) through the use of restriction enzymes that cut the DNA of L. monocytogenes with a low frequency, generating simple restriction patterns (10-20 bands) thereby simplifying the analysis, which is performed through a software that allows fast and easy comparison of isolates. The PFGE has shown more discriminative power than most used molecular techniques for L. monocytogenes typing. The standardized PFGE protocol (CHEF variant) for subtyping of L. monocytogenes requires the combination of the restriction enzymes ApaI and AscI, thus reducing the running time at 30h. By analyzing and clustering data from PFGE was possible grouping L. monocytogenes isolates in three genetic lineages. The nomenclature of the lineages varies between researchers, however, generally it is known that lineage I include serotypes 1/2b, 3b, 4b, 4d, 4e, and 7, lineage II serotypes 1/2a, 3a, 3c and 1/2c, and lineage III serotypes 4a and 4c, as well as some strains of serotype 4b. However, it has been reported the existence of a lineage IV which was first identified using the technique MLGT (Multilocus genotyping) and consists of serotype 4a, 4b and 4c, which differ considerably from lineage III members. None of the papers reviewed mentioned the clustering of strains from lineage IV through PFGE, suggesting that this technique may not be the best for discriminating between lineages III and IV.
Mots-clés
Electroforesis en gel de campo pulsadoKeywords
Pulsed field gel electrophoresisDes thèmes
ElectroforesisListeria monocytogenes
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