Evaluación de la susceptibilidad antifúngica, caracterización proteómica y virulencia de aislamientos clínicos colombianos en Cryptococcus neoformans
Data
2018-06-18Autor(es)
Gómez Ruíz, Ginneth PaolaDirector(es)
Parra Giraldo, Claudia MarcelaAvaliador
Escandón Hernández, PatriciaPublisher
Pontificia Universidad Javeriana
Faculdade
Facultad de Ciencias
Programa
Bacteriología
Título obtido
Bacteriólogo (a)
Tipo
Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Pregrado
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Resumo
Estudios han demostrado diferentes características fenotípicas relacionadas con la virulencia de Cryptococcus neoformans, revelando su importancia en la patogenicidad. El propósito de nuestra investigación fué evaluar la relación entre la susceptibilidad o resistencia a antifúngicos a través de los lineamientos de CLSI con la técnica de microdilución y la capacidad patogénica de aislamientos clínicos de C. neoformans en el modelo invertebrado de Galleria mellonella. Para lo cual fueron seleccionados 29 aislamientos clínicos, según el desenlace clínico y origen geográfico del paciente.
En la evaluación de la patogenicidad se emplearon controles de alta (H99) y baja (JEC21) patogenicidad, se determinó el tamaño capsular antes y después de la inoculación, así como la capacidad fagocítica, la actividad enzimática, el tipo de pareja sexual, y la susceptibilidad a Anfotericina B, Voriconazol y Fluconazol mediante los lineamientos del CLSI.
El 100% de los aislamientos fueron sensibles a Anfotericina B y a Voriconazol. El 6.8% SSD a fluconazol (MIC ≥16- 32μg/ml) y el 92,4% fueron sensibles a Fluconazol. La mortalidad en G. mellonella fue de 8 días (p < 0,05); de los 29 aislamientos 5 presentaron una media de supervivencia de 2 y 3 días comparados con H99 (p< 0,01). El promedio del porcentaje de fagocitosis fue de 22% (Valor maximo76% y Valor mínimo 3%), el tamaño celular y capsular posterior a la inoculación con C. neoformans aumento 2.84 μm. La actividad enzimática fue del 41.3% en proteasas; y 37.9% fenoloxidasa. El 97.3% de los aislamientos clínicos fueron pareja sexual tipo alfa.
No se encontró relación entre las características fenotípicas específica y la susceptibilidad antifúngica en la determinación de un perfil de alta o de baja patogenicidad.
Abstract
Studies have shown different phenotypic characteristics related to the virulence of Cryptococcus neoformans, revealing its importance in pathogenicity. The purpose of our research was to evaluate the relationship between susceptibility or resistance to antifungal agents through the CLSI guidelines with the microdilution technique and the pathogenic capacity of clinical isolates of C. neoformans in the invertebrate model of Galleria mellonella. For which 29 clinical isolates were selected, according to the clinical outcome and geographical origin of the patient.
In the evaluation of pathogenicity high (H99) and low (JEC21) pathogenicity controls were used, the capsular size was determined before and after the inoculation, as well as the phagocytic capacity, the enzymatic activity, the type of sexual partner, and the susceptibility to Amphotericin B, Voriconazole and Fluconazole through the CLSI guidelines.
100% of the isolates were sensitive to Amphotericin B and Voriconazole. The 6.8% SSD to fluconazole (MIC ≥16-32μg / ml) and 92.4% were sensitive to Fluconazole. Mortality in G. mellonella was 8 days (p <0.05); Of the 29 isolates, 5 presented a mean survival of 2 and 3 days compared with H99 (p <0.01). The average percentage of phagocytosis was 22% (maximum value76% and minimum value 3%), the cell and capsular size after inoculation with C. neoformans increased 2.84 μm. The enzymatic activity was 41.3% in proteases; and 37.9% phenoloxidase. 97.3% of the clinical isolates were an alpha-type sexual partner.
No relationship was found between the specific phenotypic characteristics and the antifungal susceptibility in the determination of a profile of high or low pathogenicity.
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