Caracterización de las alteraciones celulares en modelos in vitro deficientes de la enzima NAGLU generados a partir de las líneas celulares HEK 293FT, U-87MG y SH-SY5Y

Niño Traslaviña, Katherin Dayana

Caracterización de las alteraciones celulares en modelos in vitro deficientes de la enzima NAGLU generados a partir de las líneas celulares HEK 293FT, U-87MG y SH-SY5Y

dc.contributor.advisor	Alméciga Díaz, Carlos Javier
dc.contributor.advisor	Espejo Mojica, Angela Johana
dc.contributor.author	Niño Traslaviña, Katherin Dayana
dc.contributor.evaluator	Uribe Ardila, Jesús Alfredo
dc.contributor.evaluator	Barreto Prieto, Alfonso
dc.contributor.evaluator	Sánchez Álvarez, Nayibe Tatiana
dc.date.accessioned	2025-06-19T13:08:16Z
dc.date.available	2025-06-19T13:08:16Z
dc.date.created	2025-02-14
dc.description.abstract	La Mucopolisacaridosis IIIB (MPS IIIB) es un desorden metabólico hereditario causado por mutaciones en el gen NAGLU, lo que resulta en la acumulación de heparán sulfato en los lisosomas y membranas celulares. Esta acumulación provoca disfunción celular, apoptosis, daño tisular y falla orgánica. La MPS IIIB es una enfermedad neurodegenerativa que causa deterioro motor, retraso en el desarrollo, trastornos del sueño y demencia, que generalmente ocurre alrededor de los 3 y 4 años, con una incidencia de 1 en 200.000 nacidos vivos. La investigación actual se enfoca en los defectos celulares en el sistema nervioso central, particularmente en las neuronas. Sin embargo, los efectos en otros tipos celulares, como los astrocitos, que juegan un papel crítico en la homeostasis cerebral, siguen siendo en su mayoría desconocidos. Este estudio tuvo como objetivo generar modelos celulares deficientes en NAGLU, usando el sistema CRISPR/Cas9, en las líneas celulares HEK 293FT, U-87MG (astrocitoma) y SH-SY5Y (neuroblastoma). Para este fin, se diseñó un vector con un gRNA dirigido a los exones 1 y 2 del gen NAGLU. Se evaluó la actividad enzimática y se confirmó la generación de indels mediante secuenciación. Estos modelos se caracterizaron luego evaluando la masa lisosomal, la acumulación de lípidos y GAGs totales, la proliferación celular, la autofagia, la masa mitocondrial y el estrés oxidativo. La edición génica resultó en una reducción de más del 65% en la actividad enzimática de NAGLU en las líneas HEK 293FT y U87MG, mientras que para las células SH-SY5Y no fue posible obtener clones con reducción en la actividad enzimática. Las poblaciones celulares mostraron un aumento en la masa lisosomal, acumulación de GAGs totales y lípidos neutros, mayor estrés oxidativo, una tasa de proliferación reducida, disfunción en la autofagia y en el funcionamiento mitocondrial. Estos modelos pueden contribuir al entendimiento de la fisiopatología de la MPS IIIB, así como el desarrollo e identificación de potenciales estrategias terapéuticas.	spa
dc.description.abstract	Mucopolysaccharidosis IIIB (MPS IIIB) is an inherited metabolic disorder caused by mutations in the NAGLU gene that results in the accumulation of heparan sulphate in lysosomes and cell membranes. This accumulation leads to cellular dysfunction, apoptosis, tissue damage, and organ failure. MPS IIIB is considered a neurodegenerative disease that causes motor impairment, developmental delay, sleep disturbance and dementia and usually presents between the ages of 3 and 4 years with an incidence of 1 per 200,000 live births. Research currently focuses on cellular defects in the central nervous system, particularly in neurons. However, the effects on other cell types, such as astrocytes, which play a key role in brain homeostasis, are unknown and there are no readily available cellular models to evaluate therapeutic strategies. Therefore, this study aims to characterize cell models deficient in the NAGLU enzyme, which were generated using the CRISPR/Cas9 editing system in the HEK 293FT and U-87MG cell lines. These models showed cellular alterations such as decreased enzyme activity and mitochondrial mass, as well as increased lysosomal mass, neutral lipids, total GAGs and total ROS species. These models will contribute to the development of therapeutic strategies and a better understanding of MPS IIIB.	eng
dc.description.degreelevel	Maestría	spa
dc.description.degreename	Magíster en Ciencias Biológicas	spa
dc.format	PDF	spa
dc.format.mimetype	application/pdf	spa
dc.identifier.instname	instname:Pontificia Universidad Javeriana	spa
dc.identifier.reponame	reponame:Repositorio Institucional - Pontificia Universidad Javeriana	spa
dc.identifier.repourl	repourl:https://repository.javeriana.edu.co	spa
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10554/70134
dc.language.iso	spa	spa
dc.publisher	Pontificia Universidad Javeriana	spa
dc.publisher.faculty	Facultad de Ciencias	spa
dc.publisher.program	Maestría en Ciencias Biológicas	spa
dc.rights.accessrights	info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.coar	http://purl.org/coar/access_right/c_abf2
dc.rights.licence	Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional	*
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dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/	*
dc.subject	MPS IIIB	spa
dc.subject	Gen NAGLU	spa
dc.subject	CRISPR/CAS9	spa
dc.subject	Modelos celulares	spa
dc.subject	U-87MG	spa
dc.subject	HEK 293FT	spa
dc.subject.armarc	Maestría en ciencias biológicas - Tesis y disertaciones académicas	spa
dc.subject.armarc	Neuronas	spa
dc.subject.armarc	ARN Guía de Kinetoplastida	spa
dc.subject.armarc	Sistema Nervioso Central	spa
dc.subject.armarc	Técnicas In Vitro	spa
dc.title	Caracterización de las alteraciones celulares en modelos in vitro deficientes de la enzima NAGLU generados a partir de las líneas celulares HEK 293FT, U-87MG y SH-SY5Y	spa
dc.type.coar	http://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc
dc.type.driver	info:eu-repo/semantics/masterThesis
dc.type.hasversion	http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa
dc.type.local	Tesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría	spa